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ELISA實驗步驟詳解

發布日期:2024-04-07 17:28:15   瀏覽量 :35
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1、固相載體選擇

聚苯乙烯:具有較強的吸附蛋白質的性能,抗體或抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學活性。

聚氯乙烯:聚氯乙烯對蛋白質的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值也略高。

良好的ELISA板應該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間性能相近。


2、包被

①板孔的選擇:ELISA級別的微孔板

②抗體選擇:選擇支持ELISA實驗的抗體,根據推薦濃度稀釋或摸索最適濃度

③包被緩沖液:pH9.6碳酸鹽緩沖液或pH7.2磷酸鹽緩沖液

④包被溫度:2-8 ℃過夜包被或室溫(37℃)包被2h

⑤包被濃度:包被濃度隨載體和包被物的性質可有很大的變化。一般包被濃度為10ug/ml-20ug/ml。


3、封閉

①包被之后一定要立即封閉(封閉非特異性抗體)

②選擇效果較好的封閉劑(細胞培養級BSA、Tween等)


4、加樣及孵育

①加樣時應將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產生氣泡。

②孵育的時間及溫度參考試劑盒說明書。如有條件,建議加樣孵育時使用shaker震蕩儀,推薦軌道直徑3mm,轉速在500±50rpm;

③檢測抗體、酶標物的稀釋比例、孵育溫度、孵育時間嚴格根據說明書提示;

④洗板對于ELISA來說,是極其關鍵的一步,保證ELISA的特異性

⑤封板膜一定要一次一換,切勿二次甚至多次使用,以防交叉污染


5、顯色和終止

①使用前需檢查,底物在加入96孔板之前應為無色透明

②顯色底物需現配現用,避免污染

③孵育時間,說明書上為參考范圍,具體需要根據實驗條件自行摸索??蓞⒖紭饲鷿舛茸畲罂椎念伾?,變為藍色較明顯時即可


*以上內容來自網絡

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